第二抗體是指能和抗體結合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。二抗是利用抗體是大分子的蛋白質具有抗原性的性質，去免疫異種動物，由異種動物的免疫系統產生的針對于此抗體的免疫球蛋白。二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM或IgA等）均具有反應性。以下列舉二抗的原理及特點：

1、SABC法

??原理：SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物su(Biotin)*的高度親和力這一生物學性質，先將生物su與辣根過氧化物酶(HRP)結合，形成生物su化HRP，然后與鏈酶親和素按一定比例混合，形成SABC復合物。用生物su化二抗與第一抗體結合，再與SABC復合物聯結形成抗原～抗體～生物su化二抗～ SABC復合物。最后用底物顯色劑顯色。

??特點：該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點。

2、SP法

??原理：根據生物su(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強結合力的原理設計。在一抗（兔源與鼠源）與相應的靶抗原結合后，生物su化標記的抗多價二抗與一抗特異結合；二抗上標記的生物su與標記了辣根過氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結合，形成抗原～特異性一抗～生物su化的二抗～HRP 標記的鏈霉親和素復合物。

??特點：該法孵育時間短（通常為10min），靈敏度高以及低背景染色等特點。

3. Polymer酶標二抗法

??原理：該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈，將該多聚物與二抗結合，然后可再標記上多個HRP/AP酶分子，所以同樣具有很高的信號放大作用。

??特點：靈敏度高；操作步驟簡單；無需進行內源性的生su封閉。

4. 直接酶標二抗法

??該法是將HRP/AP酶分子直接標記于二抗上。因此需要普通的酶標二抗即可完成。實驗簡單，成本低，但是因為沒有信號放大作用，所以對很多表達豐度不是很高的抗原就可能檢測不到。