第二抗體是指能和抗體結(jié)合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測(cè)抗體的存在，放大一抗的信號(hào)。二抗是利用抗體是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì)，去免疫異種動(dòng)物，由異種動(dòng)物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對(duì)于此抗體的免疫球蛋白。二抗針對(duì)某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM或IgA等）均具有反應(yīng)性。以下列舉二抗的原理及特點(diǎn)：

1、SABC法

??原理：SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物su(Biotin)*的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì)，先將生物su與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合，形成生物su化HRP，然后與鏈酶親和素按一定比例混合，形成SABC復(fù)合物。用生物su化二抗與第一抗體結(jié)合，再與SABC復(fù)合物聯(lián)結(jié)形成抗原～抗體～生物su化二抗～ SABC復(fù)合物。最后用底物顯色劑顯色。

??特點(diǎn)：該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。

2、SP法

??原理：根據(jù)生物su(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強(qiáng)結(jié)合力的原理設(shè)計(jì)。在一抗（兔源與鼠源）與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后，生物su化標(biāo)記的抗多價(jià)二抗與一抗特異結(jié)合；二抗上標(biāo)記的生物su與標(biāo)記了辣根過氧化物酶（HRP）的鏈霉親和素結(jié)合，形成抗原～特異性一抗～生物su化的二抗～HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。

??特點(diǎn)：該法孵育時(shí)間短（通常為10min），靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。

3. Polymer酶標(biāo)二抗法

??原理：該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈，將該多聚物與二抗結(jié)合，然后可再標(biāo)記上多個(gè)HRP/AP酶分子，所以同樣具有很高的信號(hào)放大作用。

??特點(diǎn)：靈敏度高；操作步驟簡(jiǎn)單；無需進(jìn)行內(nèi)源性的生su封閉。

4. 直接酶標(biāo)二抗法

??該法是將HRP/AP酶分子直接標(biāo)記于二抗上。因此需要普通的酶標(biāo)二抗即可完成。實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，成本低，但是因?yàn)闆]有信號(hào)放大作用，所以對(duì)很多表達(dá)豐度不是很高的抗原就可能檢測(cè)不到。