酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。
 

　　一、包被抗原
 

　　1.   用 50mM  的碳酸鹽包被緩沖液(pH 9.6)溶解抗原，使抗原濃度為 10-20 μg/ ml， 加 100 μl/孔到 96 孔酶標板， 4 oC 放置過夜。
 

　　2.   第二天棄去包被液后， 用 PBST 洗滌 3 次，每孔加入 150 μl  1% BSA 37 oC封閉 1 小時。
 

　　3.   PBST 洗滌 3 次后，每孔加入 100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對照樣品， 37 oC 孵育 2 小時。
 

　　4.   PBST 洗滌 5 次后，加入 100μl 稀釋后的 HRP 標記的二抗，37 oC 孵育 1 小時。
 

　　5.   PBST 洗滌 5 次后，顯色劑顯色 20min 后，酶標儀上讀取 A405 吸收值。
 

　　二、包被細胞
 

　　1.   在 96 孔培養板上接種細胞數為 1 x 104  cells/well ，37℃過夜培養。
 

　　2.   第二天用 PBS 洗滌培養板 2-3 次。
 

　　3.   加入 125 µl/well 10% Formalin(1:10 稀釋) , 室溫下固定 15 min。
 

　　4.   用 ddH2O 洗滌培養板 3 次，并晾干，儲藏在 2-8oC 備用。
 

　　5.   用 PBST 洗滌 3 次，每孔加入 150 μl 1% BSA 37 oC 封閉 1 小時。
 

　　6.   PBST 洗滌 3 次后，每孔加入 100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對照樣品， 37 oC 孵育 2 小時。
 

　　7.   PBST 洗滌 5 次后， 加入 100 μl 稀釋后的 HRP 標記的二抗,37 oC 孵育 1 小時。
 

　　8.   PBST 洗滌 5 次后，顯色劑顯色 20min 后，酶標儀上讀取 A405 吸收值。
 

　　50mM 的碳酸鹽包被緩沖液： 0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液,4℃,保存, Na2CO3 0.15 克, NaHCO3  0.293 克,蒸餾水稀釋至 100 ml。
 

　　ABTS 作為底物進行顯色反應(10ml)：
 

　　1)、0.2M Na2HPO4 2.4ml
 

　　2)、0.1M    檸檬酸 2.6ml
 

　　3)、ddH2O  5ml
 

　　4)、ABTS 5mg
 

　　5)、H2O2(30%)    4 ul(用前加入)
 

　　注 意：
 

　　1、一般做倍比稀釋進行檢測，需要有相應的對照血清。
 

　　2、不同的顯色系統對應不同的光吸收值。