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      決定PCR反應(yīng)特異性主要因素
    1. 發(fā)布日期:2025-04-07      瀏覽次數(shù):395
      •   PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。
         
          PCR反應(yīng)特異性主要決定因素:
         
          1、引物。引物的結(jié)構(gòu)和長度是PCR特異性的關(guān)鍵。此外,引物濃度過高會增大形成引物二聚體的概率,從而降低PCR特異性。
         
          2、復(fù)性溫度。在Tm值允許范圍內(nèi),選擇較高的復(fù)性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結(jié)合,提高PCR反應(yīng)的特異性。
         
          3、延伸時間。延伸時間過長會導(dǎo)致非特異性擴增帶的出現(xiàn)。
         
          4、Mg2+濃度。Mg2+濃度對PCR擴增的特異性有顯著影響。Mg2+濃度過高時,容易出現(xiàn)非特異性擴增,使反應(yīng)特異性降低。
         
          5、DNA聚合酶的種類和數(shù)量。不同種類的酶對PCR特異性的影響程度不同;酶的量過多更容易引起非特異性擴增。
         
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