ELISA試劑盒是一種用于檢測生物樣本中特定抗原或抗體的生物化學工具。其全稱是酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）試劑盒。ELISA試劑盒通過利用抗原與抗體之間的特異性結合反應，結合酶催化底物顯色，來實現對目標物質的定量或定性檢測。

使用ELISA試劑盒時需要注意以下幾個關鍵問題，以確保實驗的準確性和可靠性：

1、嚴格遵循說明書

每個ELISA試劑盒都有詳細的說明書，必須嚴格按照說明書的操作步驟進行，包括試劑的配制、加樣、孵育、洗滌、顯色和結果讀取等。

2、試劑盒的選擇

選擇適合的ELISA試劑盒，考慮種屬、樣本類型、檢測因子的濃度范圍以及檢測靈敏度和特異性。比較不同品牌和廠家的產品，考慮其技術資料、性能參數和用戶評價。

3、試劑盒的保存與平衡

ELISA試劑盒應按照標簽說明書儲存，通常在2-8℃的溫度下保存，以確保其穩定性和活性。對于長時間不使用的試劑盒，建議置于-20℃或更低的溫度下保存，以延長其有效期。試劑盒從冷藏環境中取出后，應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，以確保試劑的穩定性和準確性。

4、樣本處理

①.?保存與預處理

避免反復凍融樣本，分裝后-80℃保存（短期可4℃）。

溶血/脂血樣本需離心去除干擾物（如紅細胞釋放過氧化物酶）。

②.?稀釋與加樣

樣本稀釋倍數需與說明書一致（如5倍稀釋結果需×5換算）。

加樣時槍頭懸空至孔底，避免觸碰孔壁導致交叉污染。

5、實驗操作的規范性

加樣與孵育：各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。在酶標板的相應孔中加入待檢樣本和對照樣本，一般每孔加入100μL左右的樣本或對照液，注意避免產生氣泡。將酶標板放入孵育箱中，在37℃下孵育30分鐘至1小時，以確保樣本中的抗原與酶標板上的抗體以及標記抗體能夠充分結合。?

6、安全與廢棄物處理

①.安全操作：底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

②.廢棄物處理：所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

通過遵循上述注意事項，可以提高ELISA實驗的準確性和可靠性，確保實驗結果的有效性。