內毒素ELISA檢測試劑盒試驗步驟：

　　1、加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

　　3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　5、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　6、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

　　7、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

　　8、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 

　　內毒素ELISA檢測試劑盒試驗注意事項：

　　1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

　　2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

　　3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間一般控制在5分鐘內，如標本數量多，使用排槍加樣。

　　4．請每次測定的同時做標準曲線，一般做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6．底物請避光保存。

　　7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。