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      elisa檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定應(yīng)留意以下原理
    1. 發(fā)布日期:2019-03-22      瀏覽次數(shù):1468
      • ELISA檢測(cè)系統(tǒng)可以說(shuō)是現(xiàn)在使用多的檢測(cè)方法,而且技術(shù)手段很多,對(duì)于花板,假陽(yáng)性,全顯色,全部顯色,顯色比空缺還低,這些都起到了至關(guān)重要的作用,一定要多注意。
        應(yīng)留意以下原理:因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,這種物理吸附長(zhǎng)短特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴(lài)和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

        包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,所以保留抗原很重要,我做重組蛋白時(shí),師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)因?yàn)樵囼?yàn)的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。
        還有有的包被原可能不是蛋白,對(duì)于和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被,親和素:先親和素先包被載體,加入化的DNA,這種包被方法平均、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。


         

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