1、ELISA試驗中樣品都要做復孔或三孔，然后計算每個濃度規范品的均勻OD值，復孔的變異系數應該小于20%。

　　2、均勻OD值減去空白孔的OD值。

　　3、制造規范曲線。

　　以減去本底后的OD值為X軸，規范品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。主張運用適宜的軟件來作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數、對數、四參數方程等)并從中挑選一條zui適宜的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數據符合，能夠將規范品的濃度作為未知數，將對應的OD值帶入該方程，計算出規范品的濃度，得到的成果應該與實際濃度很接近(+/-10%)。挑選擬合度zui高的那條曲線。
 

　　假如出現規范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對照孔的OD值差別很大)，或出現跳孔的現象，可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能趕快進行下一步操作、增加樣品或其它試劑時操作的辦法不對、孵育方位避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發、酶標板孔問參加的試劑量不同，相對應的解決辦法是加樣時請當心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時也請當心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、增加試劑時請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內，汲取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、承認孵育環境不透光，蓋板膜將酶標板密封好、運用已校正過的微量加樣器，如將*次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以確保參加液體體積的一致性。