豬轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)elisa檢測試劑盒操作流程

樹林間積著半尺深的枯葉，風(fēng)一吹，旋轉(zhuǎn)著飛揚起來，又均勻地鋪散下去，掩蓋了那一條傾斜著盤旋到山頂?shù)男健＝酉聛斫榻B  豬轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)elisa檢測試劑盒操作流程

樣品收集、處理及保存方法：

1）血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，10×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能

不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟：

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37℃溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1、加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50?l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40?l，然后再加待測樣品10?l（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50?l，空白孔除外。

6、顯色：每孔先加入顯色劑A50?l，再加入顯色劑B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

7、終止：每孔加終止液50ml，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

8、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。