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      ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)背景深全部呈有色,問題解決方法有了
    1. 發(fā)布日期:2020-05-21      瀏覽次數(shù):1118
      •    ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的試驗(yàn)確診方法。盡管ELISA試劑盒的操作過程看似簡單,但有時(shí)還是會(huì)出現(xiàn)一些特殊的問題,好比說實(shí)驗(yàn)中背景深全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
          根據(jù)以往技術(shù)分析,可能存在的原因有一下幾條:
          1、樣品稀釋液污染
          解決辦法:棄去稀釋液,重新配置;
          2、不正確的孵育時(shí)間,溫度(尤其是底物孵育的時(shí)間)
          解決辦法:zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。*按照說明書要求;
          3、吸頭重復(fù)使用,未洗凈或消毒不*
          解決辦法:吸頭盡可能一次性使用;
          4、偶聯(lián)抗體(streptavidin-HRP)濃度過高
          解決辦法:按照說明書調(diào)整到合適的濃度;
          5、ELISA板子不正確的貯存
          解決辦法:酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃;使用結(jié)合力低點(diǎn)的Elisa板;
          6、實(shí)驗(yàn)過程中洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留
          解決辦法:洗液準(zhǔn)確配制;充分洗滌,靜置15秒,*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染;
          7、沒有正確封閉
          解決辦法:在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動(dòng)物蛋白或延長封閉時(shí)間;
          8、底物污染,未避光保存,出現(xiàn)顏色
          解決辦法:棄去底物,重新配置;
          9、樣本溶血嚴(yán)重
          解決辦法:建議使用非溶血或輕微溶血樣本,嚴(yán)重溶血樣本會(huì)導(dǎo)致背景偏高。
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