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      進口ELISA試劑盒要求處理的方法
    1. 發(fā)布日期:2020-09-29      瀏覽次數(shù):1116
      • 進口ELISA試劑盒實驗原理:

        進口ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標(biāo)本中結(jié)核病(TB)。用純化的牛結(jié)核病(TB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中結(jié)核病(TB)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的結(jié)核病(TB)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色, 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標(biāo)本中牛結(jié)核病(TB)的存在與否。

        進口ELISA試劑盒樣本處理及要求:

        血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

        血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

        尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

        細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

        組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入進口ELISA試劑盒一定量的,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

        標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
        不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。?

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