激素ELISA檢測試劑盒使用方法

一、樣品 DNA 的制備

1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA提取試劑盒兼 容。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。本 試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。

二、引物的制備（在樣品制備室進行）

2.按引物標簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見引物試管上

的標簽），使得兩條引物的濃度均為 10μM（10 pmol/μL），然后各取 110μL 混合在一起得 220μL，標注為引物混合物，放冰上待用。220μL 足夠 100 次 qPCR 反應。

三、稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，

因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照， 只提供可以直接使用的長為 52bp 的 DN段作為陽性對照。

3.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

4.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。

5.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得

1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)， 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7.換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

8.換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得

1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

9.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

激素ELISA檢測試劑盒實驗步驟

一、懸浮細胞的染色

將正常培養和誘導凋亡的懸浮細胞（0.5~1×106）用PBS洗2次，加入100 ul Binding Buffer和FITC標記的Annexin-V（20 ug/ml）10 ul，室溫避光30 min，再加入PI（50 ug/ml）5 ul，避光反應5 min后，加入400 ul Binding Buffer，立即用FACScan進行流式細胞術定量檢測（一般不超過1 h）， 同時以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作為陰性對照。
 
二、貼壁培養的細胞染色

先用0.25%的消化，洗滌、染色和分析同懸浮細胞。

三、 爬片細胞染色

同上，*后用熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡進行觀察。