鰓霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書

鰓霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 鰓霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運輸：
1、鰓霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可保存，但應(yīng)避免反復凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

特點優(yōu)勢：
    1.特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
    2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
    5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

    6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

磷酸化D激酶衰減蛋白1抗體 英文縮寫： phospho-DOK1 (Ser450)

可溶性附著蛋白α-SNAP抗體 英文縮寫： Alpha SNAP

信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體 英文縮寫： STAT4

線粒體鐵轉(zhuǎn)運蛋白2抗體 英文縮寫： Mitoferrin 2

腫瘤抑制蛋白18抗體 英文縮寫： ST18

鋅指轉(zhuǎn)錄蛋白Sall1抗體 英文縮寫： SALL1

鋅指轉(zhuǎn)錄蛋白Sall4抗體 英文縮寫： SALL4

轉(zhuǎn)錄因子SOX17抗體 英文縮寫： SOX17

溴化丙胺太林相關(guān)蛋白2抗體 英文縮寫： STOML2

S100鈣結(jié)合蛋白A8抗體 英文縮寫： S100A8

唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素抗體 英文縮寫： SIGLEC10

唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素1抗體 英文縮寫： Sialoadhesin

轉(zhuǎn)錄因子SP3抗體 英文縮寫： SP3

轉(zhuǎn)錄因子SP6抗體 英文縮寫： SP6

鰓霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書SPOP蛋白抗體 英文縮寫： SPOP

鈉離子/?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運蛋白抗體 英文縮寫： SLC10A1

14抗體 英文縮寫： Somatostatin 14

協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4-A4抗體 英文縮寫： SLC4A4

肺表面活性蛋白D抗體 英文縮寫： SFTPD

血影蛋白A鏈紅細胞型抗體 英文縮寫： Spectrin alpha chain, erythrocytic 1

分選連接蛋白5抗體 英文縮寫： SNX5

分選連接蛋白2抗體 英文縮寫： SNX2

分選連接蛋白7抗體 英文縮寫： SNX7

核轉(zhuǎn)錄因子抗體 英文縮寫： SOX1

轉(zhuǎn)錄因子SOX7抗體 英文縮寫： SOX7

液體卵子結(jié)合生成堿性螺旋蛋白抗體 英文縮寫： Sohlh1