槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒說明書

槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒說明書組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒說明書4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒說明書2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。

特點優(yōu)勢：
    1.特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
    2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
    5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

    6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體 英文縮寫： IFITM1

干擾素誘導(dǎo)蛋白44抗體 英文縮寫： IFI44

5-三磷酸肌醇受體3抗體 英文縮寫： ITPR3

干擾素omega 1蛋白抗體 英文縮寫： IFNW1

干擾素alpha 7蛋白抗體 英文縮寫： IFNA7

干擾素β抗體 英文縮寫： IFN-Beta

DNA結(jié)合抑制因子1抗體 英文縮寫： ID1

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白202抗體 英文縮寫： IFI-202

腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 英文縮寫： intestinal FABP/IFABP/FABP2

生長抑制因子基因1抗體 英文縮寫： ING1

白介素8抗體 英文縮寫： IL-8/CXCL8

整合素連接激酶-1抗體 英文縮寫： ILK-1

磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗體 英文縮寫： phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180)

磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體 英文縮寫： Phospho-IKK alpha(Ser180) + IKK beta(Ser181)

磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體 英文縮寫： Phospho-IKK alpha/beta (Ser176 + Ser180)

細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運同源蛋白46抗體 英文縮寫： IFT46

白細(xì)胞介素-10受體a抗體 英文縮寫： IL-10RA

白細(xì)胞介素-13受體a1抗體 英文縮寫： IL-13Ra1

免疫相關(guān)鳥苷三磷酸酶基因抗體 英文縮寫： IRGM

白細(xì)胞介素-13受體a2抗體 英文縮寫： IL-13Ra2

嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL1抗體 英文縮寫： I-309

磷酸化胰島素樣生長因子1受體抗體 英文縮寫： phospho-IGF1R (Tyr1161)

胰島素降解酶抗體 英文縮寫： IDE

槍狀肝吸蟲PCR檢測試劑盒說明書白介素12抗體 英文縮寫： IL-12

白介素4抗體 英文縮寫： IL-4

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白9抗體 英文縮寫： IGFBP9