BM 無縫克隆試劑盒

公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

商品屬性

保存條件：-20℃保存。
產品介紹：
利用痘苗病毒的拓撲異構酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點將PCR產物定向克隆到線性化的pBM28載體中。適用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5 等高保真DNA聚合酶擴增的平末端PCR產物。pBM28 載體類似于公司的pENTR/D-TOPO入門載體， 具有attL1 和attL2，為gateway系統中的入門載體。引物M13F(-21)和M13R可用于菌落PCR和測序鑒定。
產品特點：
（1）連接反應僅需 5 分鐘。
（2）只適合平末端 PCR 產物的快速、高效、定向克隆。
（3）載體采用了新的制備工藝，零背景，無需藍白斑篩選。
（4）與pBM27載體相比，pBM28載體無標簽序列。
（5）載體為壯觀霉su抗性。
注意事項：
（1）引物要求：PCR 引物5’端不能進行磷酸化修飾，普通商業化引物即可。上游引物的5’ 端添加CACC 四個堿基（CACC 為真核表達所必需的Kozak 序列）。
（2）DNA 聚合酶：選用Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和Xerox 等高保真DNA 聚合酶用于PCR 擴增。
（3）連接時間：5-15 分鐘，一般為 15 分鐘。
（4）連接溫度：室溫 (22℃-37℃)，可使用PCR儀控溫。反應溫度為25℃。若片段有高GC等復雜結構，可在37℃反應。
（5）產物要求：為保證PCR產物完整，建議72℃后延伸5-10分鐘。連接前使用瓊脂糖凝

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