漏蘆PCR鑒定試劑盒*

特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。 
實驗流程：
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
Raji，人Butt's瘤細(xì)胞 Human1酸三鈣(>98%,BR)Calcium phosphate, tribasic質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

FAS Others Human 人 CD95 / Fas / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DL-硒代蛋氨酸(USP)DL-Selemine質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),USP

人胎盤絨膜癌細(xì)胞;BeWo蜜二糖Melibiose質(zhì)量規(guī)格：>98%,水合物

CLEC5A Others Cymolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 草酸鈉(>98%，BC) oxalate質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC

CM-R034大鼠肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL鎢酸鈉二水(>98%,BR) tungstate, dehydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
EC109，人食管癌細(xì)胞美拉諾坦II；MTII質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRMelatan ⅡAcetate

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0926 人腦動脈血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL質(zhì)量規(guī)格：>99%Meloxicam

大鼠肺泡巨噬細(xì)胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Gemcitabine HCl

IL23R Others Rat 大鼠 IL23R / IL23 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甲磺酸質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRGemifioxacin Mesylate

肺大靜脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)甲磺酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Gemifioxacin Mesylate
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) D-甲酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：0.98D-Alanine Methyl Ester

人臍動脈平滑肌細(xì)胞cDNAHUASMC cDNAD-叔丁酯鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：0.99D-Alanine tert-Butyl Ester

V79細(xì)胞，中國倉鼠肺細(xì)胞 人肺癌亞歷山大細(xì)胞系,PLC/PRF/5細(xì)胞 膀胱上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-質(zhì)量規(guī)格：0.98D-Arginine

猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1D-核糖-5-1酸二鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：>85%,美國進口D-Ribose 5-phosphate di salt hydrate

VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蘇木色精，蘇木素質(zhì)量規(guī)格：進分Hematoxylin
漏蘆PCR鑒定試劑盒*恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2亞甲基二水楊酸(異構(gòu)體的混合物)(>90.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(T)Methylenedisalicylic Acid (mixture of isomers)

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化);PC-12(低分化) 肝癌細(xì)胞，BEL-7402細(xì)胞 D3細(xì)胞，129小鼠ES細(xì)胞2-氨基-2',5-二氯二苯甲酮(>98.0%(N))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)2-Ami-2',5-dichlorobenzophene

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細(xì)胞 Human