香加皮探針法PCR鑒定試劑盒說明書

實(shí)驗(yàn)流程：
1. 整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。

特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。 
  Gliclazide  質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 牛主要組織相容性復(fù)合體(MHC/BoLA)ELISA檢測(cè)試劑盒Bovinemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/BoLAELISAKit 96T/48T

（標(biāo)準(zhǔn)品）  Gliclazide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品 人6酮前列腺素(6-K-PG)試劑盒 Human 6-keto-prostaglandin,6-K-PG ELISA Kit

  Glyburide/Gliebenclamide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 英文名稱MouseIerleukin-13，IL-13ELISAKIT小鼠白介素-13(IL-13)規(guī)格：96T/48T

（標(biāo)準(zhǔn)品）  Glyburide/Gliebenclamide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片組織CASPASE-5蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

(標(biāo)準(zhǔn)品)  Glimepiride  質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatcoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISA試劑盒大鼠Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

  Glimepiride  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠瘦素(Leptin)ELISA試劑盒 ，英文名： Leptin ELISA Kit

  Griseofulvin;Fulcin  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR-1)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor1,VEGFR-1ELISAkit 96T/48T

(標(biāo)準(zhǔn)品)  Griseofulvin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品 人高危型狀瘤病毒衣殼蛋白L1(HR-HPVL1)抗體(IgG)試劑盒 Human high risk papillomavirus L1-capsids(HR-HPVL1)aibody(IgG)ELISA kit

透明質(zhì)酸鈉；   hyaluronate  質(zhì)量規(guī)格：>95%,蛋白≤0.1% ratgrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit大鼠促生長(zhǎng)激素釋放激素(GRH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

  Hydrocortisone  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) BAX(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
Cyclopropyl 2-fluorobenzyl ketone  中文名：  分子式：C11H11FO  度：98.0%  微量DNA凝膠回收試劑盒   50T

4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine   中文名：  分子式：C7H10ClNS  度：98.0%  MiniELGelExactionKit   100T

5,6,7,7a-Tetrahydrothieno[3,2-c]pyridine-2(4H)-one   中文名：  分子式：C7H10ClNOS  度：98.0%  微量樣品DNA提取試劑盒   50T

Pidotimod  中文名：匹多莫德  分子式：C9H12N2O4S  度：98.0%  MiniEleDNAKit   100T              

Dicyclanil  中文名：地昔尼爾  分子式：C8H10N6  度：98.0%  微晶纖維素   50g
尿苷-5'-二葡萄糖鈉鹽(UDPG)  Uridine-5-diphosphoglucose di salt   質(zhì)量規(guī)格：>98%,Sigma 小鼠雌激素轉(zhuǎn)移酶(SULT1E1)ELISA試劑盒 ，英文名： SULT1E1 ELISA Kit

5-鳥苷一二鈉鹽(GMP)  GMP  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠雌三醇(E3)ELISA試劑盒 ，英文名： E3 ELISA Kit

腺苷-5單(進(jìn)口原裝)   AMP   質(zhì)量規(guī)格：>99,ALFA原裝 小鼠0酸核糖基轉(zhuǎn)移酶1(HP1)ELISA試劑盒 ，英文名： HP1 ELISA Kit

腺苷-5單(AMP)   Adenosine-5-monophosphoric acid   質(zhì)量規(guī)格：>98,BR 小鼠級(jí)組織趨化因子6Ckine(CCL21)ELISA試劑盒 ，英文名： CCL21 ELISA Kit

5'-   5-Bromouracil   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)ELISA試劑盒 ，英文名： HHIP ELISA Kit

   Uracil   質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠促紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒 ，英文名： EPO ELISA Kit

胞嘧啶   Cytosine   質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒 ，英文名： LH ELISA Kit

胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)  Cytosine   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠促甲狀腺激素(TSH)ELISA試劑盒 ，英文名： TSH ELISA Kit

硫酸腺嘌呤   Adenine sulfate   質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

硫酸腺嘌呤(標(biāo)準(zhǔn)品)  Adenine sulfate   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒 ，英文名： TSH ELISA Kit
香加皮探針法PCR鑒定試劑盒說明書Naphthalene-1-aldehyde,certified 標(biāo)準(zhǔn)品 MecopropD6 66-77-3 純品型，100MG 特征形態(tài) 固態(tài)

標(biāo)準(zhǔn)品 alpha-Pinene 389-08-2 純品型，0.1g 特征形態(tài) 固態(tài)

萘肽磷 標(biāo)準(zhǔn)品 Mecoprop-P 1491-41-4 純品型，50MG 特征形態(tài) 固態(tài)
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。