麥芽探針法PCR鑒定試劑盒說明書

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。 
RPE Others Human 人 RPE / RPE2-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 鈉Cefoxitin 質(zhì)量規(guī)格：>90.1%,USP

小鼠肉瘤瘤株;S180鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）Cefoxitin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人膠質(zhì)細(xì)胞(少突細(xì)胞)(HO) (1×106 )Valsartan 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP30

原代表皮角化細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml（標(biāo)準(zhǔn)品）Valsartan 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株;Mo7e 大鼠卵巢上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL Glipizide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
EPHA7 Others Mouse 小鼠 EPHA7 / EHK-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) DL-DL-Threonine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人B細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOSL-腺苷L-Adesine  質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

GREM1 Others Mouse 小鼠 Gremlin 1 / GREM1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 腺苷-2'-單1酸鹽Adesine-2'-mophosphate 質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

CL-0445Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2腺苷 3'-單1酸鹽水合物Adesine 3'-Mophosphate Hydrate質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

MM, 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 R3細(xì)胞 C2C12(人肌肉成纖維細(xì)胞瘤)腺苷胺類Adesine Amine Congener質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
抗霉菌溶液ABAMS；氨來諾質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAmlexax

大額牛肺細(xì)胞;BFR-L1 中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞，CHO細(xì)胞 Lncap(前列腺癌細(xì)胞)蘿酸；D-地衣酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品(+)-Usnic acid

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM933蘿酸；D-地衣酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR(+)-Usnic acid

SERPINE1 Others Human 人 PAI-1 / SerpinE1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 茴香霉素質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAnisomycin, from Streptomyces griseolus

CL-0040BT-474(人導(dǎo)管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2胰多肽，大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRPancreatic Polypeptide, rat
麥芽探針法PCR鑒定試劑盒說明書GC-1, 鼠精原細(xì)胞 swiss鼠胚胎成纖維細(xì)胞，3T3 swiss細(xì)胞 NCL-H548(人胰腺癌細(xì)胞)25克

人胃癌細(xì)胞;MKN-45基炳1醋-2-(二安基)酯;基炳1醋 N,N-二安基酯 2-(DiMqthylcMi)qthyl Mqthccrylctq; 867-47-

CTLA4 Others Human 人 CTLA4 / CD152 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 嶙酸100克

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC肌動(dòng)蛋白(廣譜)100克RT

F9 Others Human 人 F9 / FIX /
實(shí)驗(yàn)流程：
1. 整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。