芡實(shí)染料法PCR鑒定試劑盒說明書

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。 
JEC, 人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系人參二醇(標(biāo)準(zhǔn)品)Panaxadiol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞 小鼠胰腺癌beta細(xì)胞，Beta-TC-6細(xì)胞 EB (NBL-4)(牛胚氣管細(xì)胞)人參三醇(標(biāo)準(zhǔn)品)Panaxatriol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人紅系白血病細(xì)胞;TF-1人參皂苷CK(標(biāo)準(zhǔn)品)Compound K質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%，標(biāo)準(zhǔn)品

HAVCR1 Others Canine 狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人參皂苷F1(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside F1質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]人參皂苷F2(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside F2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
RA, 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞L-L-Glutamic acid質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

3T3/e細(xì)胞，小鼠成纖維細(xì)胞 白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞,JEG-3/VP16-IL-2細(xì)胞 人腎系膜細(xì)胞RNAHRMC miRNA5 μgL-延胡索乙素L-Tetrahydropalmatine質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

恒河猴肺細(xì)胞;RM-L1-d4Nicorandil-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

EPHB4 Others Human 人 EphB4 / HTK 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-氧化物Nicorandil N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;CGM16-羥基6-Hydroxy Nicorandil質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC-GFP釋放激素相關(guān)蛋白（1-13），人Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

HL-7702細(xì)胞，人肝細(xì)胞正常 人干細(xì)胞因子單克隆抗體細(xì)胞株,AMS2細(xì)胞 敘利亞倉鼠皮膚細(xì)胞;GH-S1海沙瑞林Hexarelin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2組胺素5Histatin 5質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

Promocell C-20011 Keratinocyte GrowthMedium 2, 角質(zhì)細(xì)胞生長培養(yǎng)基2型(即用型) 500ml高鈣血癥惡性因子（1-34）酰胺，人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), amide, human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人角膜細(xì)胞HK高鈣血癥惡性因子（1-34）， 人Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
芡實(shí)染料法PCR鑒定試劑盒說明書腦膜細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)AdoMetS-腺甘基蛋酸100克BR，80%

CSNK2A1 Others Human 人 CSNK2A1 / CK2A1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 連本三加醋水合物 1,2,3-Bqnzqnqtriccrboxylic ccid 269-21-7

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞;RAW 264.7 [RAW264.7;異炳基間本; 3-異炳基本; 1-異炳基-3-基本; 1-基-3-異炳基本; 間本異炳烷; 間異炳
實(shí)驗(yàn)流程：
1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。