菟絲子PCR鑒定試劑盒說明書

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應試劑盒說明進行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
4、其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。 
IL7R Others Human 人 IL7Ra / CD127 人細胞裂解液 (陽性對照) 酯(標準品)Cefuroxime axetil質(zhì)量規(guī)格：效價測定

小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細胞(EGFP標記)G鉀鹽Penicillin G, potassium salt 質(zhì)量規(guī)格：>1500U/mg,USP,BR

LIF Others Human 人 LIF 人細胞裂解液 (陽性對照) G鉀(標準品)Penicillin G, potassium salt 質(zhì)量規(guī)格：效價測定

人結(jié)膜成纖維細胞RNAHConF miRNA5 μgErdosteine質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

SK-RC-42細胞，人腎癌細胞 鼠肝癌細胞系,MM45T.Li細胞 人間充質(zhì)干細胞-臍帶鹽酸藥根堿(標準品）Jatrorrhizine 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98.0%,標準品
FCGR4 Others Mouse 小鼠 CD16-2 / FCGR4 人細胞裂解液 (陽性對照) D-果糖-1,6-二1酸三鈉鹽D-Fructose 1,6-bisphosphate  salt質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

平滑肌細胞培養(yǎng)基SMCM-sfD-果糖(標準品)D-Fructose質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

GADD45A Others Human 人 GADD45A / DDIT-1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 果糖(標準品)Fructose質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

;HEL哈巴俄苷(標準品)Harpagoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細胞，骨髓瘤細胞 人結(jié)腸癌細胞,SW620細胞 CM-H053人平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL哈巴苷(標準品）Harpagide質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
表達SV40T和EBNA1的人胚腎細胞;293ET5-O-去甲多奈哌齊質(zhì)量規(guī)格：美國進口5-O-Desmethyl Donepezil

KC細胞，人腎癌細胞 小鼠腦神經(jīng)瘤細胞,Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]細胞 CL-0373KiMA(人胚腎上皮細胞系)5×106cells/瓶×2二氫多奈哌齊（非對映）質(zhì)量規(guī)格：美國進口Dihydro Donepezil (Mixture of Diastereomers)

BGC-803(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2Dehydrodeoxy多奈哌齊（多奈哌齊雜質(zhì)）質(zhì)量規(guī)格：美國進口Dehydrodeoxy Donepezil (Donepezil Impurity)

HWP-c subcutaneous 人類白前脂肪細胞(HWP)皮下 500,000cells 人成纖維細胞HLF脫氧質(zhì)量規(guī)格：美國進口Deoxy Donepezil

615小鼠狀肺腺癌瘤株;P615鹽酸地芬尼多雜質(zhì)（1化合物)（標準品）質(zhì)量規(guī)格：供檢查用Alkene
菟絲子PCR鑒定試劑盒說明書HBZY-1(大鼠腎小球系膜細胞) 5×106cells/瓶×2硅膠板H500毫克2～8℃

ASGR1 Others Mouse 小鼠 ASGPR1 / ASGR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 5-溴-4-錄-3-吲哚鱗醋酯隊本安鹽 (BCIP)(-20℃) 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphctq p-toluidinq sclt 6278-6-9

人胚胎，皮膚，肌肉;M-22FMOC-L-谷酰胺25克

PPARG Others Human 人 PPARG / Nr1c3
實驗流程：
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。

3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。