靈芝探針法PCR鑒定試劑盒說明書

實驗流程：
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。

特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。 
二、DNA提取：
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。 
Hacat(人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0352HFF-1(人成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 白牦牛皮膚細(xì)胞;Yak-2天青石藍(lán)Celestine blue質(zhì)量規(guī)格：BS

小鼠T細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9天青 B 曙紅Azure B eosinate質(zhì)量規(guī)格：sigma分裝

TMED1 Others Human 人 TMED1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 利馬前列素Limaprost質(zhì)量規(guī)格：>99%

人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL天青II曙紅Azure II eosinate質(zhì)量規(guī)格：BS

AMS2細(xì)胞，人干細(xì)胞因子單克隆抗體細(xì)胞株 阪崎腸桿菌 大耳山羊皮膚細(xì)胞;LDG-3菲律賓菌素;非律平;FilipinFilipin complex from Streptomyces filipinensis質(zhì)量規(guī)格：sigma分裝
HKC(人胚腎上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌BES free acid; N,N-(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸BES free acid質(zhì)量規(guī)格：>99%

內(nèi)皮細(xì)胞生長添加物ECGSCEP-18770CEP-18770質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

CLEC12A Others Human 人 CLEC12A / CLL-1 / DCAL2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 地馬格列Managlinat Dialanetil/CS-917質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

CSSTSP1 中華鱉脾來源細(xì)胞鹽酸諾拉曲噻latrexed di質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

CM-M124小鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞*培養(yǎng)基100mLPD 173074PD 173074質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
TNFRSF17 Others Human 人 TNFRSF17 / BCMA / CD269 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 黃芪多糖(50%)質(zhì)量規(guī)格：>50%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T6-Swiss albi黃芪多糖(30%)質(zhì)量規(guī)格：>30%2-(Chloromethyl)-4-(4-Nitrophenyl)-1,3-thiazole

SAE1 Others Human 人 SAE1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-奎寧環(huán)酮鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%3-Quinuclidine HCl

QGY-7701, 人肝癌細(xì)胞伊索拉定質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BRIrsogladine

NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞 人腦視神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞，Hs 683細(xì)胞 RF/6A(猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞)黃柏酮（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Obacune
靈芝探針法PCR鑒定試劑盒說明書PDIA4 Others Human 人 ERP72 / PDIA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Camphore2-莰酮100克CP，96%

C57BL/6小鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells芐基三基錄化銨;三基下基錄化銨 BqnzyltriMqthylcMMoniuM chloridq 26-93-9

HME6細(xì)胞，人色素瘤細(xì)胞 動物雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0919 10B Naphthol Blue Bl
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。