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      Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶

      更新時間:2024-12-04

      簡要描述:

      Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶儲存:置于-20°C 可保存 3 年,避免反復凍融。

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      公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

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      產品名稱

      規格

      P-PR1373

      Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶

      500U

      P-PR1373

      Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶

      5000U

      產品介紹:

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      RNase R 來源于 E.coli,通過基因工程重組表達,該酶為 Mg2+依賴的 3’-5’核糖核酸外切酶。其可消化所有線性 RNAs 底物,但不能消化環狀 RNA(circular RNA)、套索 RNA(lariat RNA)、雙鏈 RNA、3’突出端<7nt 的雙鏈RNA。本酶可高效的去除不含二級結構的線性 RNA,從而純化獲得環 RNA 分子,用于后續 RNA-sequencing 等實驗。

      活性定義:在 20 mM Tris-HCl(pH7.5),100 mM KCl,0.5mM Mg2+條件下, 37°C 下水解 1 μg 的 poly-r(A)產物,所需酶量為 1 個活性單位。10xRNase R Buffer:200 mM Tris-HCl, 1 M KCl,5 mM
      MgCl2,pH7.5
      酶儲存液:20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT ,50% Glycerol, 0.1% (w/v) Tween-20, pH 7.5。
      儲存:置于-20°C 可保存 3 年,避免反復凍融。
      使用方法
      1. 配制反應體系
      RNA 1-10 μg
      10xRNase R Buffer 2.5 μl
      Rnase Inhibitor (40 U/μl) 0.5 μl
      RNase R (20 U/μl) 1-2 μl
      DEPC-treated Water up to 25 μl
      2. 37℃孵育 30-60min,反應完畢后可加入 5 mM EDTA終止反應。
      使用注意事項:
      (1) 在 total RNA 的消化中,由于含有二級結構較多的RNA,如 tRNA、rRNA、dsRNA 等,RNase R 對該類底物消化活性大幅下降,此時需要延長消化時間至 2h,并在 1h 時補加 RNase R 進行消化。必要時將反應溫度提高至 45℃,以打開含有二級結構的 RNA 分子。
      (2) 對于含有 highly structured 的 RNAs,RNase R 仍然無法消化, 稍后將推出 5’-3’的核糖核酸外切酶以解決此類問題。
      (3) 據其它文獻報道,在含有 highly structured 的 RNAs,可放大反應體積至 50 μl,可降低二級結構的影響,從而促進 RNA 的降解。
      (4) 高溫和長時間的孵育,可能導致 RNA 的非酶性斷裂(水分子的 H+對二酯鍵的攻擊)。因此,消化時間、反應溫度均需要根據特定的實驗進行優化和調整。



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