Bst 4.0 Basic Mix (液體預混)

公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

商品屬性

該制品為單一組分的 MasterMix（2 倍濃度），包含了反應緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉錄），還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性，因此無論DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行高效的恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及 RT-LAMP 擴增反應的試劑。優化的反應體系，確保快速的完成檢測試劑的反應體系建立。該系列產品不包含任何其它輔助染料，在 LAMP 的擴增搭配 OG 橙綠變色管進行可視化變色反應。除此外，該制品還可以用于其它恒溫擴增實驗，包括 CPA、SMAP 等。
儲存：長期保存制品于-20℃，保存 2 年。
使用實例（以 LAMP OG 橙綠變色為例）橙綠變色染料（OG Dye）以凍干的形式預加在 8 聯管蓋上。在 LAMP 反應完畢后（在反應完畢前，務
必不能將管蓋上染料混入反應液中），將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP 的反應產物將與 OG 染料形成強烈的綠色肉眼可見變色反應（陽性），而未發生擴增的 EP管為深橙色（陰性）。
（1）配制反應體系
在 0.2ml EP 反應管中加入下述試劑
2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl
*10xLAMP Primer Mix 2 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 20 μl
*10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、LoopF/B 分別為 4 μM、F3/B3 分別為 2 μM全部試劑加入完畢后，輕彈 EP 管底部后，再蓋上 OG 橙綠變色管（蓋上管蓋后務必不能再劇烈混合與倒置，以防止將管蓋上的 OG 染料溶解，OG 染料一旦混入反應液中將會終止 LAMP 反應）。
實驗 LAMP Primer Mix 分別采用 1、1.5、2 μl，以陰性不變色，陽性樣品正常變色為標準，作為后續測試用量。
（2）反應體系配好后，置于 60~68°C（實驗采用65°C）進行反應 20~45min。（擴增良好的引物組合，通常 25min 即可變色，一般不超過 45min，實驗設置20、25、30、45min）。
（3）觀察結果：觀察結果時，盡可能不要與配制反應空間共用，以防止污染操作臺。將反應 EP 管倒置，并手腕輕甩，反應液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料，靜置 30s。再將 EP 反應管正置，并輕甩反應液到 EP 管底部，此時擴增樣品將變為鮮艷肉眼可見綠色，而陰性未發生擴增的管將為深橙色。
注意事項
1. 在用于其它恒溫擴增反應時（如 CPA、SMAP 等），可參考如上策略進行使用，反應時間可能會需要調整。
2. 關于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應體系后，可加入一滴礦物油覆蓋于反應液上部，以減少氣溶膠的污染。
3. 鑒于特殊的生產工藝， 全系恒溫擴增 Mix 系
列均不能進行濁度分析。

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