T4 DNA連接酶9015-85-4

各位從事科研工作的小伙伴們，實驗中所用到的試劑、配制試劑的液體，有時可能是實驗成敗的關鍵，因此大家在使用時一定要留意各種試劑的級別。原則上講，純度越高越好，但是價格也就越高，所以要根據(jù)各自的需要選擇合適的品質(zhì)，避免不必要的浪費！

T4 DNA連接酶9015-85-4
英文名稱：T4 DNA Ligase 
：9015-85-4
分子量：55.3kDa，單體
級別：BR
來源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
活性定義：是指在ATP-PPi交換反應中，37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個weiss單位相當于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位：20ul反應體系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量） 
抑制劑：當反應體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時，可強烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意：T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現(xiàn)象，電泳前需處理樣本或分子量標準。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉(zhuǎn)化時，連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細胞體積中的10%；電轉(zhuǎn)化之前，先用方抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
T4 DNA連接酶9015-85-4質(zhì)量控制：測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測：粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀(以下信息僅供參考)：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復合體中缺口的修復；連接酶介導的RNA檢測；位點特異性突變；擴增片段長度多態(tài)性
保存： -20°C

產(chǎn)品規(guī)格
GR：優(yōu)級純。主成份含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準物質(zhì).
AR：分析純。主成份含量很高、純度較高，干擾雜質(zhì)很低，適用于工業(yè)分析及化學實驗。
CP：化學純。主成份含量高、純度較高，存在干擾雜質(zhì)，適用于化學實驗和合成制備。
LR：實驗純。主成份含量高、純度較差，雜質(zhì)含量不做選擇，只適用于一般化學實驗和合成制備。
BR：生化試劑。用于配制生物化學檢驗試液，和生化合成。質(zhì)量指標注重生物活性雜質(zhì)?？商娲甘緞┖陀袡C合成。
BS：生物染色劑。適用于配制生物標本染色液。質(zhì)量指標注重生物活性雜質(zhì)?？商娲甘緞┖陀袡C合成。
T4 DNA連接酶9015-85-4Ind：顯色劑。
HPLC：適用于高壓液相色譜的試劑。
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試劑開瓶的問題
隨著全自動生化分析儀的普及，“開瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學來講，還達不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內(nèi)放很長時間不需要定標，比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑，開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長時間開瓶不定標或校準，會使檢測結(jié)果發(fā)生偏離，在國外有的項目有明文規(guī)定，必須72小時之標，比如BUN。但是在國內(nèi)的某些實驗室為了方便，很長時間都不作校準，導致測定結(jié)果的不準確。解決辦法：了解試劑的特性，及時對部份項目進行校準，對于每天標本量不多的醫(yī)院，可按1～2天的用量取用試劑放入儀器。

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